Robust-Lumi™ ECL 是一款应用于 Western blotting 检测的超灵敏、低背景的化学发光辣根
过氧化物酶底物。样品制备，转膜及抗体孵育等信号检测前环节操作与常规 Western blotting 步骤
一致。GeneCodex 公司提供 3 种剂型：常规剂型 Robust-Lumi™ ECL（A 液和 B 液）以及检测
灵敏度更高的 Robust-Lumi™ ECL Advanced（增强型）和 Robust-Lumi™ ECL Platinum（超敏型）。
Robust-Lumi™ ECL 使用步骤：
1. 常规 Western blotting 蛋白样品制备定量、电泳、转膜。
2. 将蛋白样品转移至 PVDF 或 NC 膜上，室温封闭 1 小时。
3. 室温下，一抗孵育转印膜 1 小时，摇床轻摇使抗体孵育均匀。
4. 洗膜 3 次，每次 5 分钟。
5. 室温下，二抗孵育转印膜 1 小时，摇床轻摇使抗体孵育均匀。
6. 洗膜 3 次，每次 5 分钟。
7. 将 Robust-Lumi™ ECL 试剂盒中的 A 液和 B 液以（1︰1）等体积混匀，将混匀后的
ECL 检测工作液充分浸润完成抗体孵育的蛋白转印膜（约 0.1 mL/cm2），反应 2 分钟，
吸出反应液，用保鲜膜覆盖湿润的转印膜，暗室内曝光压片或者使用 CCD 成像。
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